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English EC blue para detección de Coliformes y Escherichia coli en aguas
Descripción:
Tanto el Ministerio de Salud, Trabajo y Bienestar (MHLW) en 2003 como la Asociación de Obras Hidráulicas de Japón (JWWA) en 2001 aprobaron oficialmente EC Blue como uno de los métodos oficiales para la detección de Escherichia coli y Coliformes en el agua. EC Blue se desarrolló sobre la base del método de medio de cultivo de sustrato enzimático específico que se utiliza como sustrato enzimático específico para la detección de E. coli y coliformes en agua.
Base del método.
El sustrato de la enzima colorimétrica, Xgal (5-bromo-4-cloro-3-indolil-β-D galactopiranósido) en el medio se descompone para resaltar el color azul / azul-verde por la β-galactosidasa generada específicamente por coliformes. También MUG (4-Metil-Umbeliferil-β-Ｄ-Glucurónido) en el medio se descompone por la β-Glucuronidasa que genera E. coli específicamente, para aislar un sustrato de fluorescencia de 4-Metil-Umbeliferona. La serie EC Blue se presenta en un paquete especial a presión (EC Blue 100P), una botella desechable (EC Blue 100) o un tubo desechable (EC Blue 10). Estos paquetes se esterilizan mediante irradiación de electrones; por lo tanto, no es necesaria la preparación del medio. El procedimiento de prueba de EC Blue 100P es muy simple y solo lo agrega a la muestra de prueba. Además, el procedimiento de prueba de EC Blue 100 y 10 es simple y agrega agua de muestra en estas botellas (tubos).
Composición del medio
Por 1 litro ………………………………………………………17,4 g
Peptona ‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥……… 5,0 g
Cloruro de sodio ‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥….‥‥ 5,0 g
Fosfato monopotásico ‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥….‥‥..‥ 1,0 g
Fosfato dipotásico ‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥……..‥‥ 4,0 g
Lauril sulfato de sodio ‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥…….‥‥‥ 0,1 g
Piruvato de sodio ‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥….‥.‥ 1,0 g
Nitrato de potasio ‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥….‥.‥ 1,0 g
Isopropil-β-D-tiogalactopiranósido (IPTG) ‥‥‥‥‥‥‥‥‥. 0,1 g
5-Bromo-4-cloro-3-indolil-β-D-galactopiranósido (Xgal) ‥ 0,1 g
4-Metil-Umbeliferil-β-D-glucurónido (MUG) ‥‥‥‥‥‥‥‥ 0,1 g
pH 7,1 ±
Procedimiento de operación EC Blue 100P para prueba cualitativa de 100 ml
1) Separe una pieza del paquete Snap de los 5 paquetes de acoplamiento.
2) Prepare un tubo de cultivo esterilizado (botella). Dispense 100 ml de la muestra capturada limpia de la botella de recolección en un tubo de cultivo esterilizado (botella).
3) Consulte las siguientes figuras y agregue un paquete de EC Blue 100P en el tubo de cultivo (botella). Apriete la tapa y agite bien para disolver el medio en la muestra de agua.
4) Juzgue el cambio de color (azul – azul verde) del medio después de 24 horas de incubación a 35 – 37 ℃. Cuando confirme el cambio de color azul-azul verde, verifique la fluorescencia adicionalmente (para la detección de E. coli).
Procedimiento de operación EC Blue 100 para prueba cualitativa de 100 ml
1) Prepare EC Blue 100 (botella) y dispense 100 ml de muestra de prueba en la botella en condiciones de esterilización. El frasco está graduado con una marca de 100 ml en la circunferencia.
2) Apriete la tapa y agite bien para disolver el medio en la muestra de agua.
3) Evalúe el cambio de color (azul – azul verde) del medio después de 24 horas de incubación a 35 – 37 ℃. Cuando confirme el cambio de color azul-azul verde, verifique la fluorescencia adicionalmente (para la detección de E. coli).
Procedimiento de operación. EC Blue 10 Para prueba cuantitativa (MPN) de 10 ml
1) Prepare una serie de diluciones de 10 veces asépticamente (consulte el método MPN en los documentos oficiales emitidos).
2) Dispense 10 mL de muestra diluida en cada tubo. El tubo está graduado en una marca de 10 ml en la circunferencia.
3) Apriete la tapa y agite bien para disolver el medio en la muestra de agua.
Interpretación de resultados:
1) Para coliformes: Si el color del medio de cultivo (azul – verde azulado) es más oscuro o igual que el comparador de color EC Blue bajo luz natural, determine el resultado de la prueba como “Coliformes positivos”.
2) Para E. coli: cuando confirme el cambio de color azul-azul verde; compruebe la fluorescencia adicionalmente bajo una lámpara UV de 365 nm. Si la fluorescencia de la muestra es más fuerte o igual a la del comparador EC Blue con una lámpara UV de 365 nm, determine el resultado de la prueba como “E. coli positivo ”
Almacenamiento y vida útil:
Almacenamiento
Mantener a temperatura ambiente (1-30 ℃), en la oscuridad.
Duración
* EC Blue 100P Dos (2) años después de la fabricación
* EC Blue 100 Dos (2) años después de la fabricación
* EC Blue 10 Un (1) año después de la fabricación